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猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒的样本处理及要求

发布时间: 2020-10-24  点击次数: 340次
  猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒的实验原理是在微孔板上涂上纯化的抗体以制成固相载体,然后添加标本或标准物质和生物素化的抗指示剂抗体并彻底洗涤HRP标记的抗生物素蛋白,然后用底物TMB显影。TMB在过氧化物酶的催化作用下转化为蓝色,在酸的作用下转化为黄色。颜色的强度与样品中的指示剂呈正相关。用酶标仪测量450nm处的吸光度(OD值),以计算样品浓度。
  猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒样品处理及要求主要如下:
  1、血清:血液在室温下自然凝结10-20分钟,离心约20分钟(2000-3000rpm),仔细收集上清液。如果在储存过程中发生沉淀,请再次离心。
  2、血浆:应根据样品要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟,并离心20分钟(2000-3000rpm),仔细收集上清液。如果在储存过程中形成沉淀,则应再次离心。
  3、尿液:用无菌试管收集并离心约20分钟(2000-3000rpm)。仔细收集上清液,如果在储存过程中形成沉淀,请再次离心。
  4、细胞培养上清液:检测分泌成分时,用无菌试管收集。离心约20分钟(2000-3000rpm),仔细收集上清液。检测细胞中的成分时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度将达到约100万/ml。通过反复冷冻和融化,细胞被破坏并且细胞内组分被释放。离心约20分钟(2000-3000rpm)。如果在储存过程中形成沉淀,请再次离心。
  5、组织样本:切割样本后,称重。加入一定量的PBS,pH7.4。解冻后,使用液氮快速冷冻并储存以备后用,并保持2-8°C的温度。加入一定量的PBS(pH7.4),然后用手或匀浆器将样品彻底匀浆。离心约20分钟(2000-3000rpm),仔细收集上清液。分装后,将对一部分进行测试,将其余部分冷冻以备后用。
  6、猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒标本应在收集后尽快提取。提取应根据相关文献进行,提取后应尽快进行实验。如果不能立即进行测试,则可以将样品保存在-20°C下,但应避免反复冻融。
  7、由于NaN3抑制了辣根过氧化物酶(HRP)的活性,因此无法检测到含NaN3的样品。
 
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