使用人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒要注意的几个细节

　　人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒采用竞争法检测样本中人膜联蛋白A3(ANXA3)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本，再加入生物素标记的识别抗原，在37℃下孵育30min，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原，然后加入亲和素-HRP，在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合，洗涤后结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。

　　人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒是免疫诊断中的一项新技术，已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原。

　　标本要求：

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒注意事项：

　　1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

　　2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

　　3.一次加样时间控制在5分钟内。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

　　5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。

　　6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

　　7.底物请避光保存。不要用其它厂家的试剂替换本人膜联蛋白A3 （ANXA3）ELISA试剂盒中的试剂。