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兔子催乳素(PRL)ELISA试剂盒样品制备指南

发布时间: 2020-11-25  点击次数: 375次
  ELISA生物学测试是一种实验诊断方法,具有高灵敏度,特异性强和重现性好的特点。由于其试剂稳定,易于保存,易于操作且结果判断更加客观,因此已广泛用于免疫学检测的各个领域。兔子催乳素(PRL)ELISA试剂盒适用于在人血清或血浆中对人戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体进行体外定性检测。
  在实验中,样品制备也很重要。操作不良可能会影响实验结果。如何准备样品?接下来,我们就向你介绍兔子催乳素(PRL)ELISA试剂盒样品的制备方法。
  1.细胞培养物上清液
  ①将培养基移至离心管,4℃,1,500rpm离心10分钟;
  ②立即进行上清液的分装(血清)并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  2.细胞提取物
  ①将组织培养板放置在冰上;
  ②吸出培养基并用预冷PBS轻轻洗涤细胞一次;
  ③吸出PBS,加入100mm培养板加入0.5ml完全提取缓冲液;
  ④收集细胞至在倾斜板中,然后移至经过预冷的离心管中;
  ⑤短暂涡旋后在冰上孵育15-30分钟;
  ⑥在4℃下13,000xrpm离心10分钟,沉淀不溶性内容物;
  ⑦将上清液(这里是指可溶性细胞提取物)分装至预冷的离心管中,并于-80℃保存,尽可能减少反复冻融次数。
  3.条件培养基
  ①将细胞接种到完全(含血清)生长培养基中,使细胞增殖达到一定的融合率;
  ②弃去培养基,数毫升预热PBS小心洗涤,重复洗涤步骤;
  ③弃去PBS洗涤液并小心加入无血清培养基;
  ④孵育1-2天;
  ⑤将培养基移至离心管,4℃1,500rpm离心10分钟;
  ⑥立即分装上清液(血清)并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  4.乳汁
  ①收集样品并在4℃下以10,000xg离心2分钟;
  ②分装上清液并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  5.血浆
  ①将全血收集到含抗凝剂的管中,例如BD抗凝真空采血管或添加0.1M柠檬酸钠至1/10终体积;
  ②4℃3,000rpm离心10分钟;
  ③立即分装上清液(血浆)并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  6.尿液
  ①收集样品并在4℃下以10,000xg离心2分钟;
  ②等分上清液(血清)并在-80℃下保存样品,尽可能减少冻融循环次数。
  7.唾液
  ①收集样品并在4℃下以10,000xg离心2分钟;
  ②立即分装上清液(血浆)并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  8.血清
  ①将全血收集到未经处理的测试管中,或者到不含抗凝剂的管中,如BD血清用真空采血管;
  ②在室温下连续孵育20分钟;
  ③4℃3,000rpm离心10分钟;
  ④立即分装上清液(血浆)并在-80℃下保存样品,尽可能减少反复冻融次数。
  9.兔子催乳素(PRL)ELISA试剂盒组织提取物
  ①用干净的工具解剖组织,best好在冰上、尽快进行,以防止被蛋白酶降解;
  ②将组织置于圆底的微量离心管中,并浸入液氮中进行“速冻”,将样品保存在-80℃下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆;
  ③对于约5mg的组织片,可向管中添加约300μl完全提取缓冲液(查看细胞/组织提取缓冲液配方),然后用电动匀浆器匀浆;
  ④清洗刀片两次,每次清洗使用300μl完全提取缓冲液,然后在4℃下维持恒定搅拌2小时(例如置于冷室中的回旋振荡器上);
  ⑤4℃13,000xrpm离心20分钟。置于冰上,将上清液(这里是指可溶的蛋白质提取物)分装至新、预冷的管中并在-80℃下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。
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