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大鼠基质金属蛋白酶-13((MMP-13)操作

发布时间: 2019-12-06  点击次数: 306次

大鼠基质金属蛋白酶-13MMP-13)酶联免疫 )酶联免疫分析

检测范围:::: 96T

10µg/L-240µg/L

使用目的::::

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-13MMP-13)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶-13MMP-13)水平。用纯化的大鼠基质金属蛋白酶-13MMP-13)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-13MMP-13),再与 HRP 标记的基质金属蛋白酶-13MMP-13)抗体结合,形成抗体抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成z终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-13MMP-13)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠基质金属蛋白酶-13MMP-13)浓度。

 

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl然后再加待测样品 10µl(样品z终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3

8.洗涤:操作同 5

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟

10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

 

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