大鼠基质金属蛋白酶-13（（MMP-13）操作

大鼠基质金属蛋白酶-13（MMP-13）酶联免疫 ）酶联免疫分析

检测范围：：：： 96T

10µg/L-240µg/L

使用目的：：：：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶-13（MMP-13）水平。用纯化的大鼠基质金属蛋白酶-13（MMP-13）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-13（MMP-13），再与 HRP 标记的基质金属蛋白酶-13（MMP-13）抗体结合，形成抗体抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成z终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-13（MMP-13）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠基质金属蛋白酶-13（MMP-13）浓度。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品z终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟

10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。