植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒的操作经验分享

　　植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物呕吐毒素（vomitoxin）的含量。呕吐毒素的化学名为3a，7a，l5一三羟基一l2，l3一环氧单端孢酶一9一烯I8酮，是一种B型单端孢酶烯族化合物，为一种倍半烯衍生物。分子量为296．3，分子式为C15H20O6，结晶为无色针状，熔点为l5l～153℃，α，β一不饱和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。广泛存在于，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外，它还常与其它的霉卤毒素共同污染农作物，进入人体后可以相互影响。

　　植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒的操作详情：

　　1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

　　4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，与植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

　　8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　注意事项：

　　经测定，植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

　　警告：本试剂盒中使用了稀硫酸作为终止液，其具有轻微腐蚀性，使用植物呕吐毒素（vomitoxin）ELISA试剂盒时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。