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植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒的操作经验分享

发布时间: 2019-10-16  点击次数: 346次
   植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒的操作经验分享
  植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物呕吐毒素(vomitoxin)的含量。呕吐毒素的化学名为3a,7a,l5一三羟基一l2,l3一环氧单端孢酶一9一烯I8酮,是一种B型单端孢酶烯族化合物,为一种倍半烯衍生物。分子量为296.3,分子式为C15H20O6,结晶为无色针状,熔点为l5l~153℃,α,β一不饱和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。广泛存在于,主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物,也污染粮食制品,人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外,它还常与其它的霉卤毒素共同污染农作物,进入人体后可以相互影响。
  植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒的操作详情:
  1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
  4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,与植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
  8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
  注意事项:
  经测定,植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
  警告:本试剂盒中使用了稀硫酸作为终止液,其具有轻微腐蚀性,使用植物呕吐毒素(vomitoxin)ELISA试剂盒时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。
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