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人核酸酶ELISA试剂盒操作步骤

发布时间: 2019-10-08  点击次数: 404次

人核酸酶酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。  

检测范围:                                                          96T

8pg/ml-280pg/ml

 

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中核酸酶含量

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中核酸酶水平。用纯化的核酸酶抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核酸酶,再与HRP标记的核酸酶抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的核酸酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中核酸酶浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(480pg/ml

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240pg/ml

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

120pg/ml

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

60pg/ml

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

30pg/ml

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

15pg/ml

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
  3. 配液:将30倍(48T20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T20倍)稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  6. 温育:操作同3
  7. 洗涤:操作同5
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  10. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  11. 计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  1. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

 

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